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首先获得要表达的目的基因,然后选择合适的载体,把目的基因与载体连线到一起,然后再通过适当的条件进行诱导(可以原核表达或真核表达),最后进行检测和鉴定
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dna在细胞核中转录为mrna,mrna在核糖体中翻译为蛋白质
热心网友的回答:
一般来说是dna转录成相应的rna 然后核糖体沿着rna运动同时翻译出多肽链 多肽链经过内建网 高尔基体加工成蛋白质
「基因过表达」的原理步骤和应用是什么?
立港娜娜的回答:
基因过表达的基本原理是通过人工构建的方式在目的基因上游加入调控元件,使基因可以在人为控制的条件下实现大量转录和翻译,从而实现基因产物的过表达。
基因过表达的步骤是:
1,构建克隆。将目的基因连线在特定的载体上,载体种类依据表达系统差异而不同。在载体上一般含有增强基因转录的promoter,不同系统中採用的promoter完全不同
2,将克隆汇入表达细胞中。在大肠桿菌,酵母和哺乳动物细胞中,构建的外源质粒直接汇入细胞即可,这个过程称为转化或转染。对于昆虫表达系统,构建的质粒还需要先转座成为桿状病毒基因组才能用于转染。
基因过表达的应用:大肠桿菌表达系统,酵母表达系统,昆虫表达系统,哺乳动物细胞表达系统和体外翻译系统(无细胞体系)。
基因过表达跟沉默操作步骤一样吗
热心网友的回答:
顾名思义,基因过表达是将某个基因大量表达的过程。这个过程可以是在基因原本所在的细胞中,也可以是在其它表达系统中进行。其基本原理是通过人工构建的方式在目的基因上游加入调控元件,使基因可以在人为控制的条件下实现大量转录和翻译,从而实现基因产物的过表达。
现在有很多成熟的表达系统用于基因过表达,常用的包括:大肠桿菌表达系统,酵母表达系统,昆虫表达系统,哺乳动物细胞表达系统和体外翻译系统(无细胞体系)。虽然这些系统各不相同,但过表达的基本步骤相似。
构建克隆。将目的基因连线在特定的载体上,载体种类依据表达系统差异而不同。在载体上一般含有增强基因转录的promoter,不同系统中採用的promoter完全不同。
将克隆汇入表达细胞中。在大肠桿菌,酵母和哺乳动物细胞中,构建的外源质粒直接汇入细胞即可,这个过程称为转化或转染。对于昆虫表达系统,构建的质粒还需要先转座成为桿状病毒基因组才能用于转染。
基因的表达。在昆虫和哺乳动物细胞体系中,转染进入细胞内的外源基因在其上游强启动子的作用下可以直接过量表达。在大肠桿菌系统中,需要加入额外的诱导剂(常用iptg)诱导表达,酵母系统中有的也需要诱导表达(例如甲醇诱导)。
体外翻译系统不用细胞,常常在细胞提取物(模拟细胞内环境)中进行基因的过量转录和翻译,其基本步骤中没有上诉第二步。
基因过表达的目的一般有两种,一是获取大量的目的基因产物,二是研究目的基因产物的生物学功能。
过表达可以让我们得到大量的目的基因产物(一般是蛋白质),用于研究或生产。比如x射线晶体学研究蛋白质三维结构首先就需要过量表达得到目的蛋白。发酵工程製备胰岛素,taq酶等蛋白类产品都需要过表达。
为了研究某一个基因产物的功能,可以在体内(一般是在这个基因本来所在的细胞中)将这个基因过表达,检测细胞的生理学变化。它和基因敲除是研究基因功能的两个重要手段。
运用中心法则简要说出基因的表达过程.
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dna→rna→蛋白质
1双螺结构解释了诸多遗传现象,规律如,分离,自由组合的物质基础2双螺结构解释了诸多变异现象,如基因突变的物质基础3双螺结构推动了遗传理论的进展,如以后形成的中心法则理论,蛋白的合成等,它是后来诸多新理论的最根本的基础 4双螺结构是基因工程等生物技术应用理论基础5对于当今人类健康,基因医疗检查它也是最...
从dna到蛋白质的过程叫基因表达 gene expression 对这个过程的调节即为基因表达调控.原核生物大多数基因表达调控是通过操纵子机制实现的。操纵子通常由 2个以上的编码序列与启动序列 操纵序列以及其他调节序列在基因组中成簇串联组成。启动序列是rna聚合酶结合并起动转录的特异dna序列。基因...
真核基因组比原核大得多,结构更复杂,含有许多重複序列,基因组的大部分序列不是为蛋白质编码的,而为蛋白质编码的基因绝大多数是不连续的。真核生物基本上是採取逐个基因调控表达的形式。真核基因表达调控的环节更多,转录前可以有基因的扩增或重排,并涉及染色质结构的改变 基因启用过程。转录后调控的方式也很多,但仍...