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目的基因的获得
一,逆转录法
逆转录法是先分离纯化目的基因的mrna,再反转录成cdna,然后进行cdna的克隆表达.
1,mrna的纯化
mrna的特点:3'末端含有一多聚腺苷酸组成的末端.
方法:亲和层析法
2,cdna第一链的合成
一般 mrna都带有3'-polya,所以可以用寡聚dt作为引物,在逆转录酶的催化下,开始cdna链的合成.
用放射性探针法检测.
3,cdna第二链的合成
以cdna第一链为模板合成第二链.
4,cdna克隆
用于cdna克隆的载体有两类:质粒dna和噬菌体.又将其分为表达型载体和非表达型载体.选用表达型载体可以增加目的基因的筛选方法,有利于目的基因的筛选.
cdn**段与载体的连线通常採用下面方法:
加同聚尾连线:在载体和cdna的3'末端加上互补的同型多聚酶序列.
人工接头连线:所谓人工接头是指用人工合成的,连线在目的基因两端的含有某些限制酶切点的寡核苷酸片断.
5,将重组体汇入宿主细胞
6, cdna文库的鉴定
7,目的cdna克隆的分离和鉴定
(1)核酸探针杂交法
(2)免疫反应鉴定法
逆转录-聚合酶反应法.该方法是mrna经逆转录合成cdna第一链,不需再合成第二链,而是在特异引物的协助下,用pcr法进行扩增,特异地合成目的cdna链,用于重组,克隆.
二,化学合成法
前提:较小的蛋白质或多肽的编码基因,必须知道目的基因的核苷酸排列顺序,或知道目的蛋白质的氨基酸顺序,再按相应的密码子推汇出dna的硷基序列.
操作:见书
限制:一,不能合成太长的基因.
二,人工合成基因时,遗传密码的简併会为选择密码子带来很大的困难.
三,费用高
基因表达
基因表达是指结构基因在生物体中的转录,翻译以及所有加工过程.
基因表达研究是指外源基因在某种细胞中的表达活动,即剪下下一个外源基因片断,拼接到另一个基因表达体系中,使其能获得既有原生物活性又可高产的表达产物.
一,宿主细胞的选择
宿主细胞应满足的要求:
分类:第一类为原核细胞,如大肠桿菌等;第二类为真核细胞,如酵母等.
1,原核细胞
(1)大肠桿菌:目前採用最多的原核表达体系.
(2)枯草芽孢桿菌
(3)链霉菌
2,真核细胞
(1)酵母:酿酒酵母应用广泛.
(2)丝状真菌
(3)哺乳动物细胞
二,大肠桿菌中的基因表达
1,载体
表达载体必须具备的条件:
(1)载体能够独立的複製
(2)具有灵活的克隆位点和方便的筛选标记
(3)具有很强的启动子
(4)具有阻遏子
(5)有很强的终止子
(6)有翻译的起始讯号
常用的表达载体:
(1)pbv220系统
(2)pet系统
2,影响目的基因在大肠桿菌中表达的因素
(1)外源基因的拷贝数
(2)外源基因的表达效率
①启动子的强弱
②核糖体结合位点
③sd序列和起始密码子atg的间距
④密码子组成
(3)表达产物的稳定性
(4)细胞的代谢负荷
(5)工程菌的培养条件
3,真核基因在大肠桿菌中的表达形式
(1)以融合蛋白的表达形式表达药物基因
由一段短的原核多肽和真核蛋白结合在一起的蛋白质,称为融合蛋白.
(2)以非融合蛋白的形式表达药物基因
(3)分泌型表达蛋白药物基因
三,酵母中的基因表达
1,载体
(1)载体的複製序列 包括yep类,yrp类,yrp类和yip类.
(2)克隆载体 由于从大肠桿菌中製备质粒比从酵母中容易,所以酵母质粒的加工和製备大部分是通过大肠桿菌进行的.
(3)表达载体 包括普通表达载体和精确表达载体.
2,影响目的基因在酵母菌中表达的因素
(1)外源基因的拷贝数
(2)外源基因的表达效率 主要与启动子,分泌讯号和终止序列有关.
(3)外源蛋白的糖基化
(4)宿主菌株的影响 表达用的酵母宿主菌应具备①菌体生长力强.②菌体内蛋白酶要较弱.③菌株效能稳定.④ 分泌能力强.
四,动物细胞中的基因表达
基因工程药品的优点是
的回答：
答案c点拨：基因工程药品利用转基因的工程菌等生产药物，生产效率高。
基因工程有什么优点
伤感美的回答：
目前世界许多国家将生物
技术，资讯科技和新材料技术作为三大重中之重技术，而生物技术可以分为传统生物技术，工业生物发酵技术和现代生物技术。现在人们常说的生物技术实际上就是现代生物技术。现代生物技术包括基因工程、蛋白质工程、细胞工程、酶工程和发酵工程等五大工程技术。
其中基因工程技术是现代生物技术的核心技术。
既然基因工程技术是如此之重要，那么什么是基因工程呢？基因工程（ge***ic engineering）是指在基因水平上，採用与工程设计十分类似的方法，按照人类的需要进行设计，然后按设计方案建立出具有某种新的性状的生物新品系，并能使之稳定地遗传给后代。根据这个定义，基因工程明显地既具有理学的特点，同时也具有工程学的特点。
「基因」这个名称已在多处提到，那么基因又是什么呢？根据国内外的教科书和权威辞典上的解释加以综合，「基因」（gene）应定义为：基因是一段可以编码具有某种生物学功能物质的核苷酸序列。
基因工程的核心技术是dna的重组技术，也就是基因克隆技术。重组，顾名思义，就是重新组合，即利用供体生物的遗传物质，或人工合成的基因，经过体外或离体的限制酶切割后与适当的载体连线起来形成重组dna分子，然后在将重组dna分子汇入到受体细胞或受体生物构建转基因生物，该种生物就可以按人类事先设计好的蓝图表现出另外一种生物的某种性状。比如前面已提到的用动物来生产人的乳铁蛋白，抗凝血酶和白蛋白。
除dna重组技术外，基因工程还应包括基因的表达技术，基因的突变技术，基因的汇入技术等。有关这些方面的技术将在以后相应的章节中予以介绍。
由于基因工程是在分子水平上进行操作，最终是为了创造出人们所需要的新品种，因而它可以突破物种间的遗传障碍，大跨度的超越物种间的不亲和性。比如在基因工程中最常使用的大肠桿菌，它是一种原核生物，但它却能大量表达来自于人类的某些基因。例如各种人的多肽生长因子基因就可用大肠桿菌来生产。
如果用常规的育种技术来做同一项工作，那么成功的机会应为零。因此，科学家们可以利用基因工程实现人类的各种物种改良的愿望。
因为现在生活在地球上的各种生物都是经过长期的生物进化演变而来，虽然不能说它们都很能适应现在的生态环境，但至少可以说它们基本上都能适应当前的生态环境。这也就是说，每种生物体内或细胞内都处于精巧的调节控制和平衡之中。当用基因工程方法引入一段外源基因片段后，原有的平衡可能被打破，有可能导致细胞内的生物学功能发生紊乱，最后有可能导致细胞生长缓慢乃至细胞死亡。
很显然，开展基因工程研究的目的既要使细胞象往常一样正常生长，又要使细胞产生甚至大量产生人类所需要的外源基因表达产物。
科技或科学技术实际上是科学和技术两个名称构成的，它们是两个既有联络又有区别的概念。科学主要是指发现自然界的规律，建立各种与自然界规律相适应的理论；而技术则是指在探索自然规律时所使用的一些方法。一些新的科学发现或新理论的建立，会导致一场技术革命，新技术新方法的建立又会推动新的自然规律的发现，因此，两者是相互促进的。
从70年代起逐步建立起来的基因工程技术，使基因或一些具有特殊功能的dn**段的分离变得十分容易。这些基因或特殊dn**段的一级结构（即它们的核苷酸序列）的测定也是十分容易的，由基因的核苷酸序列去推测蛋白质的氨基酸残基的序列也变得轻易而举。利用计算机技术可以很容易的对推测出来的蛋白质进行高阶结构的分析，可以对来自不同生物种类的基因序列进行同源性分析。
所有这些方法或技术的广泛使用，不仅大大地推动了分子生物学的迅猛发展，而且也大大推动了生命科学各个分支领域的迅速发展。因此，基因工程技术的第一个重要应用领域就是大大的推动了科学理论研究的发展。
由于基因工程是从遗传物质基础上对原有的生物（常常称之为受体生物）进行改造，经过改造的生物就会按照研究者的意愿获得某种（些）新的基因，从而使该生物获得某些新的遗传性状。这种性状可以用人的肉眼直接观察到，也可能是通过某些反应或仪器间接观察到。这种受体生物可能是微生物，植物或动物，因而它会涉及到许多生产行业。
基因工程技术几乎涉及到人类的生存所必需的各个行业。比如将一个具有杀虫效果的基因转移到棉花、水稻等农作物种中，这些转基因作物就有了抗虫能力，因此基因工程被应用到农业领域；要是把抗虫基因转移到杨树、松树等树木中，基因工程就被应用到林业领域；要是把生物激素基因转移到支物中去，这就与渔业和畜牧业有关了；如果利用微生物或动物细胞来生产多肽药物，那么基因工程就可以应用到医学领域。总之一句话，基因工程应用範围将是十分广泛的。
独初雪冉笛的回答：
这样的答案也是可以的
基因工程的有点主要体现在：目的性强，育种週期短，可克服远缘杂交不亲和障碍。
基因工程的工具有限制酶 dna连线酶和运载体。限制酶和dna连线酶的本质是蛋白质，常用的运载体是质粒，本质是dna。基因工程三种工具原理 基因工程 ge ic engineering 又称基因拼接技术和dna重组技术，是以分子遗传学为理论基础，以分子生物学和微生物学的现代方法为手段，将不同 的基因按...
最常用的运载体是质粒 有些来自原核生物 有些来自酵母菌 真核生物 是一种小型环状dna分子 运载体也可以是灭活的动植物病毒或者是噬菌体 最常用的运载体是质粒 来自原核生物 是一种环状dna分子 运载体也可以是灭活的动植物病毒或者是噬菌体 基因工程常用运载体是什么 质粒，噬菌体等东西。常用的载体有质粒...
1 用限制bai酶切割dna后，可du能产生黏性末端，也可zhi能产dao生平口末端 若要版在限制酶基因工权程中，往往採用同种限制酶切割目的基因和质粒以产生相同的黏性末端，再用dna连线酶使其直接进行连线 2 rna聚合酶识别和结合的部位是启动子 将目的基因汇入微生物细胞时，常用ca2 处理微生物细...
